ABSTRACT
Bacillus cereus is a food contaminant and a known human pathogen that can cause emetic and diarrheal syndromes. In this study we evaluated the presence of toxigenic B. cereus by multiplex PCR directly in dietary complement for children and cassava starch samples collected on Medellin, Colombia. Of 75 dietary complement for children samples evaluated, 70.7% were contaminated with toxigenic B. cereus and four different toxigenic consortia were detected: I: nheA, hblC, cytK (9.8%), II: nheA, hblC (2%), III: hblC, cytK (41.2%), IV: hblC (47%). Of 75 cassava starch samples, 44% were contaminated with toxigenic B. cereus and four different toxigenic consortia were determined: I: nheA, hblC, cytK (48.5%), II: nheA, hblC, cytK, cesB (3%), III: hblC, cytK (30.3%), IV: hblC (18.2%). In general, in dietary complement for children only enterotoxigenic consortia were detected while in cassava starch the enterotoxigenic consortia predominated over the emetic. Multiplex PCR was useful to detect toxigenic B. cereus contamination allowing direct and simultaneous detection of all toxin genes in foods. This study is the first in Colombia to evaluate toxigenic B. cereus, providing information of importance for microbiological risk evaluation in dried foods.
Bacillus cereus es un contaminante de alimentos conocido por ser patogénico para los humanos, causando síndromes de vómito y diarrea. En este estudio se evaluó la presencia de B. cereus toxigénicos utilizando PCR múltiple directamente en complementos dietarios para niños y en almidón de yuca colectados en Medellín, Colombia. De 75 muestras de complemento dietario para niños, 70,7% estuvieron contaminadas con B. cereus toxigénicos y se detectaron cuatro diferentes consorcios toxigénicos: I: nheA, hblC, cytK (9,8%), II: nheA, hblC (2%), III: hblC, cytK (41.2%), IV: hblC (47%). De 75 muestras de almidón de yuca, 44% estuvieron contaminadas con B. cereus toxigénicos y se determinaron cuatro diferentes consorcios toxigénicos: I: nheA, hblC, cytK (48.5%), II: nheA, hblC, cytK, cesB (3%), III: hblC, cytK (30,3%), IV: hblC (18.2%). En general, en los complementos dietarios para niños sólo se detectaron consorcios enterotoxigénicos, mientras que en el almidón los consorcios enterotoxigénicos predominaron sobre el emético. La PCR múltiple fue de utilidad para detectar contaminación con B. cereus toxigénicos permitiendo la detección directa y simultánea de todos los genes tóxicos en los alimentos. Este estudio es el primero en Colombia en evaluar B. cereus toxigénicos y proporciona información importante para la evaluación de riesgos microbiológicos en los alimentos pulverizados.
Bacillus cereus é um contaminante de alimentos e é conhecido por ser patogénico nos seres humanos ocasionando síndromes de vômitos e diarreia. Neste estudo foi avaliada a presença de B. cereus toxigênicos por PCR multiplex diretamente em complementos da dieta para crianças e amido de mandioca, em amostras coletadas em Medellín, na Colômbia. De 75 amostras dos complementos da dieta para crianças, 70,7% estiveram contaminadas com B. cereus toxigênicos e foram detectados quatro diferentes consórcios: I: nheA, hblC, cytK (9,8%), II: nheA, hblC (2%), III: hblC, cytK (41,2%), IV: hblC (47%). De 75 amostras de amido de mandioca, 44% estiveram contaminadas com B. cereus toxigênicos e quatro consórcios diferentes foram determinados: I: nheA, hblC, cytK (48,5%), II: nheA, hblC, cytK, cesB (3%) III: hblC, cytK (30,3%), IV: hblC (18,2%). Em geral, nos complementos da dieta para crianças foram detectados apenas consórcios enterotoxigênicos, não obstante no amido os consórcios enterotoxigênicos predominaram sobre o emético. A PCR multiplex foi útil para detectar contaminação com B. cereus toxigênico permitindo a detecção direta e simultânea de todos os genes tóxicos em alimentos. Este estudo é o primeiro na Colômbia em avaliar B. cereus toxigênico e providencia informação importante para a avaliação de riscos microbiológicos em alimentos pulverizados.
ABSTRACT
Introducción: Bacillus cereus es una bacteria contaminante de alimentos y patógena en humanos, cuya toxina emética o cereúlida (Ces) causa el síndrome emético y las enterotoxinas hemolítica o hemolisina BL (Hbl), no hemolítica (Nhe) y citotoxina K (CytK), el síndrome diarreico. Objetivo: Determinar la presencia de genes toxigénicos de Bacillus cereus en muestras de ADN obtenido directamente de fécula de maíz y de harina de trigo, mediante reacción en cadena de la polimerasa múltiple. Materiales y métodos: Se determinaron los genes toxigénicos de Bacillus cereus en muestras de ADN extraído directamente de fécula de maíz y harina de trigo, utilizando una reacción en cadena de la polimerasa múltiple específica para los genes cesB, hblC, nheA y cytK. Resultados: De 76 muestras de fécula de maíz, el 60,5% presentó los genes toxigénicos de Bacillus cereus, que fueron agrupados en seis consorcios: I: hblC, cytK (30,4%), II: nheA, hblC, cytK (21,7%), III: hblC (19,6%), IV: nheA (15,2%), V: nheA, hblC (10,9%), VI: nheA, hblC, cytK, cesB (2,2%). De 79 muestras de harina de trigo, el 65,8% presentó los genes toxigénicos de Bacillus cereus, que se agruparon en cuatro consorcios: I: nheA, hblC, cytK (80,8%), II: hblC, cytK (11,5%), III: hblC (5,8%), IV: nheA, hblC (1,9%)...
Introduction: Bacillus cereus is a human pathogen that causes two kinds of foodborne diseases, the emetic syndrome caused by emetic toxin or cereulide (Ces), and the diarrheal syndrome caused by three different enterotoxins, the hemolytic enterotoxin or hemolysin BL (Hbl), the nonhemolytic enterotoxin (Nhe) and the cytotoxin K (CytK). Objective: To determine the presence of toxigenic genes of Bacillus cereus in DNA samples directly obtained from corn starch and wheat flour using multiplex polymerase chain reaction. Material and methods: The presence of toxigenic genes of Bacillus cereus were determinedin DNA samples directly extracted from corn starch and wheat flour, using a multiplex polymerase chain reaction technique specific for cesB, hblC, nheA and cytK genes. Results: From a total of 76 corn starch samples, 60.5% had toxigenic genes of Bacillus cereus and were grouped in six consortia: I: hblC, cytK (30.4%), II: nheA, hblC, cytK (21.7%), III: hblC (19.6%), IV: nheA (15.2%), V: nheA, hblC (10.9%) and VI: nheA, hblC, cytK, cesB (2.2%). From 79 wheat flour samples tested, 65.8% had toxigenic genes of Bacillus cereus and were grouped into four consortia: I: nheA, hblC, cytK (80.8%), II: hblC, cytK (11.5%), III: hblC (5.8%) and IV: nheA, hblC (1.9%)...
Subject(s)
Humans , Bacillus cereus , Enterotoxins , Food Inspection , Multiplex Polymerase Chain ReactionABSTRACT
La esporulación, que es una respuesta de quorum sensing, es un proceso de diferenciación celular mediado por moléculas de señalización, señales fisiológicas y ambientales. Se sabe que Bacillus subtilis detecta las señales metabólicas y ambientales y éstas son integradas a un sistema de transferencia secuencial de fosfatos. Las señales son detectadas por histidina cinasas que se autofosforilan y fosforilan, a su vez, a proteínas que actúan como reguladores de respuesta y activan la expresión de genes específicos de esporulación. Dada la importancia de B. cereus desde el punto de vista epidemiológico, el potencial para bioterrorismo de B. anthracis y la importancia en biotecnología agrícola de B. thuringiensis, la investigación sobre los mecanismos moleculares de señalización y la regulación del inicio de la esporulación en estas bacterias del grupo B. cereus reviste especial interés. En esta revisión se discute la literatura sobre este tema, haciendo hincapié en las histidina cinasas y en el análisis comparativo de los genomas de B. subtilis y del grupo de B. cereus, en cuanto a las secuencias de posibles histidina cinasas y reguladores de respuesta. Cabe destacar que en los genomas del grupo B. cereus hay mayor número de histidina cinasas (10 a 14) y de reguladores de respuesta (7 a 11) putativos que en B. subtilis (6 histidina cinasas y 6 reguladores de respuesta), lo cual sugiere una mayor capacidad para responder a estímulos ambientales y metabólicos en estas bacterias.
Sporulation is a quorum sensing response and a cellular differentiation process regulated by signalling molecules and physiological and environmental signals. The regulation of sporulation initiation has been extensively studied in Bacillus subtilis and occurs through phosphorelay. B. subtilis detects metabolic and environmental signals through histidine kinases that are autophosphorylated and then transfer the phosphate group to response regulators, activating the expression of sporulation genes. However, there are other important sporulated bacilli like those from the B. cereus group. B. cereus toxins are related to food-borne intoxication, B. anthracis may be used as biological weapon in bioterrorism, and B. thuringiensis is an excellent biological control agent. Therefore, it is critical to understand the signalling processes that control sporulation initiation and the toxin synthesis. This review summarizes known literature about regulation of initiation of sporulation in the B. cereus group focusing in the role of histidine kinases and the putative open reading frames of these sensors in B. subtilis and B. thuringiensis. The genomes of the B. cereus group have 10 to 14 putative histidine kinases and 7 to 11 response regulators, compared to 6 histidine kinases and 6 response regulators in B. subtilis, implying that this last bacteria should have a lower capacity to respond to environmental and metabolic signals.
A esporulação, que é uma resposta de quorum sensing, é um processo de diferenciação celular mediado por moléculas de sinalização, sinais fisiológicas e ambientais. Sabe-se que Bacillus subtilis detecta os sinais metabólicos e ambientais e estes são integrados a um sistema de transferência sequencial de fosfatos. Os sinais são detectados por histidina cinase que, por sua vez, se autofosforilam e fosforilam, em proteínas que atuam como reguladores de resposta e que ativam a expresão de genes específicos de esporulação. Devido à importância de B. cereus do ponto de vista epidemiológico, o potencial para bioterrorismo de B. anthracis e a importância em biotecnologia agrícola de B. thuringiensis, a investigação sobre os mecanismos moleculares de sinalização e a regulamentação do início da esporulação em estas bactérias do grupo B. cereus revestem especial interesse. Nesta revisão se discute a literatura sobre este tema, colocando especial atenção nas histidina cinases, e na análise comparativa dos genomas de B. subtilis e do grupo de B. cereus, em relação às sequências de posíveis histidina cinases e reguladores de resposta. Cabe destacar que nos genomas do grupo B. cereus há maior número de histidina cinases (10 a 14) e de reguladores de resposta (7 a 11) putativos que en B. subtilis (6 histidina cinases e 6 reguladores de resposta), o que sugere uma maior capacidade para responder a estímulos ambientais e metabólicos nestas bactérias.